GD Biologia Molecular Noturno

1. Escreva uma fita de DNA codificadora de 150 nucleotídeos de extensão, 30 bases por linha, na orientação 5'-3' e que codifique para uma proteína de EXATAMENTE 41 aminoácidos.

2. Escreva a seqüência de bases de um oligonucleotídeo composto pelos primeiros nucleotídeos da região codificadora da fita de DNA escrita no item 1, de modo que a temperatura de pareamento seja próxima de 60ºC (considere 2ºC para cada A ou T e 4ºC para cada C ou G componente do oligonucleotídeo).

3. Use a imaginação para escrever a seqüência de bases de um oligonucleotídeo que seja complementar à fita desenhada no item 1, capaz de iniciar a síntese de uma fita complementar à codificadora, a partir do final da região codificadora INCLUINDO o STOP CODON que vc deve ter colocado no item 1.

4. Os dois oligonucleotídeos acima podem ser utilizados para amplificar o gene descrito no item 1 através da técnica de PCR. Além dos oligonucleotídeos, quais reagentes são necessários para a PCR?

5. Se o objetivo fosse produzir uma sonda “radioativa” para ser usada em Northern Blot, qual reagente poderia ter um átomo substituído por um isótopo radioativo? Qual reagente poderia ter o fosfato substituído por fosfato radioativo e qual a posição desse fosfato na molécula? Indique ilustrativamente na fórmula estrutural.

6. Como os oligonucleotídeos acima seriam modificados caso fosse desejado clonar o fragmento amplificado pela PCR no sítio da enzima de restrição Eco RI de um plasmídio?

7. Suponha que vc deseja modificar geneticamente uma levedura, mas sem que o DNA exógeno seja integrado em seu genoma. Como vc faria? Como é possível obter grandes quantidades deste DNA para ser introduzido na levedura?

8. Suponha que vc precise determinar a seqüência do fragmento clonado no plasmídio, quais reagentes seriam necessários além do próprio plasmídio?

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